что такое определение авидности антител
Авидность антител в диагностике инфекционных заболеваний
Традиционные иммунодиагностические методы, используемые для серологической диагностики острой фазы вирусных, бактериальных и паразитарных инфекций, имеют ряд ограничений. Часто невозможно провести четкую дифференциацию между первичной инфекцией, реинфекцией или обострением инфекционного процесса, особенно при серодиагностике инфекций с нетипичной динамикой антителообразования, когда наличие иммуноглобулинов класса М (IgM) не является достоверным и достаточным признаком для дифференциации стадий заболевания.
Таким образом, если в исследуемой сыворотке крови при наличии или отсутствии IgМ, обнаруживаются IgG с низкой авидностыо, то это свидетельствует о первичной (недавней) инфекции. Наличие же высокоавидных антител IgG говорит о вторичном иммунном ответе в случае попадания возбудителя в организм или обострения (реактивации).
Краснуха
Краснуха является инфекцией, возбудитель которой обладает бесспорным тератогенным действием, т.е. приводит к формированию пороков развития эмбриона и плода. У беременных краснуха может протекать тяжело, легко и бессимптомно. Внутриутробное заражение плода возможно при любой форме краснушной инфекции.
Только определение низкоавидных антител может быть диагностическим маркером первичной инфекции вирусом краснухи, что особенно важно при диагностическом обследовании беременных, когда необходимо дифференцировать первичную инфекцию от вторичной или реактивации инфекции.
Токсоплазмоз
Известно, что проявление клинических симптомов при приобретенном токсоплазмозе имеет низкое диагностическое значение для точного определения длительности инфекционного процесса.
Увеличение лимфоузлов может возникать в разное время с момента первичной инфекции, а нередко может сохраняться длительное время или даже возобновляться в более поздний период болезни, независимо от применения специфического прогивопаразитарного лечения.
Определение авидности IgG антител является высокоспецифичным и чувствительным методом диагностики острого первичного токсоплазмоза, что особенно важно при обследовании беременных для устранения потенциального риска появления врожденного токсоплазмоза у детей. Недавно была разработана методика измерения антиген-связывающей авидности (функциональной аффинности) IgG антител к toxoplasma gondii, позволяющая разделить низкоаффинные, антитела от высокоаффинных, которые указывают на перенесенную в прошлом инфекцию. С помощью этой методики первичная инфекция может быть идентифицирована и использованием единственной порции сыворотки.
Инфекции, вызываемые вирусами простого герпеса, цитомегаловирусом, вирусом Эпштейн-Барр относятся к инфекциям с нетипичной динамикой антителообразования (когда наличие IgМ не является достоверным и достаточным признаком для дифференциации стадий заболевания). Определение IgM антител может давать ложноотрицательные результаты, поскольку они могут вообще не образовываться, или присутствовать в количествах, трудных для определения. Ложноположительные результаты могут возникать по следующим причинам:
Для диагностики первичной инфекции целесообразно определение низкоавидных IgG антител.
Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВ И) самая распространенная внутриутробная инфекция и одна из наиболее частых причин невынашивания беременности. Риск внутриутробного инфицирования и характер поражения плода зависят от наличия антител у матери и срока инфицирования плода. При первичном инфицировании серонегативной беременной риск передачи плоду составляет примерно 50 %.
Определение авидности антител IgС рассматривается как наиболее важный серологический маркер, поскольку низко- и высокоавидные антитела IgG доминируют соответственно при недавней или длительно текущей инфекции. Использование теста на авидность IgG при позитивной реакции на IgM антитела помогает или исключить наличие первичной ЦМВИ и в ряде случаев помогает избежать необоснованных инвазивных процедур.
Вирус Эпштейи-Барр (ВЭБ)
Серологическая диагностика инфекции вирусом Эпштейн-Барр основана на определении специфических антител к нескольким антигенам, однако, не существует единого надежного теста, который бы позволял получать достоверную информацию для постановки окончательного диагноза. На ранних стадиях развития инфекции в образцах сыворотки крови пациента обнаруживаются IgM и IgG к нуклеарному антигену (VCA) (IgM-VCA e IgG-VCA). Активная фаза инфекционного мононуклеоза также характеризуется продукцией низкоавидных антител IgG к VCA, и в большинстве случаев, наличием IgG, специфичных к комплексу ранних антигенов. IgM антитела к нуклеарному антигену могут служить индикатором острой инфекции, однако ряд авторов отмечает частое возникновение ложноположительных реакций вследствие неспецифической реактивности.
Таким образом, при первичной инфекции IgG имеют низкую авидность. С течением времени, после перенесенной инфекции или в случае обострения инфекции, авидность антител повышается. Определение авидности может использоваться для выявления первичной инфекции при отсутствии или низких количествах IgM, а также для диагностики перенесенной инфекции с длительным персистированием IgМ. Тест на авидность прост в исполнении, доступен для большинства иммунологических лабораторий и в ряде стран является рутинной диагностической процедурой. Использование теста на авидность специфических IgG при краснухе, цитомегаловирусной инфекции, токсоплазмозе, инфекций вирусами Эпштейн-Барр, простого герпеса, гепатита С, совместно с традиционными серологическими методами, дает возможность установления момента первичного инфицирования с использованием одного образца сыворотки.
Авидность антител. Применение в диагностике.
По свойствам антител различают два понятия аффинность (или аффинитет) и авидность (или авидитет). Аффинность — это степень специфического сродства активного центра к антигенной детерминанте, авидность — это степень прочности связывания молекулы антитела с молекулой антигена. Чем выше аффинность (степень сpодства), тем выраженнее и авидитет (пpочность связывания). Кроме того, авидитет тем сильнее, чем больше связывающихся центров.
Термин аффинность относится к связыванию антитела с моновалентным гаптеном или с одной антигенной детерминантой. В большинстве случаев, однако, мы имеем дело со взаимодействием антисыворотки, т.е. сыворотки иммунизированного животного или человека. Для описания связывания АТ с поливалентным антигеном используют термин “авидность”. Авидность определяется многими сложными факторами, в частности, гетерогенностью антител в данной сыворотке, направленных к определенной антигенной детерминанте, а также гетерогенностью самих детерминант. Необходимо учитывать и следующее обстоятельство. Поливалентность большинства антигенов приводит к своеобразному “усиливающему” эффекту: огромное увеличение константы равновесия, возникающее из-за того, что составляющие аффинности не складываются, а перемножаются, и обеспечивает этот усиливающий эффект.
Таким образом, термин авидность используется для описания общего количества всех внутренних аффинностей обнаруженных в поликлональной антисыворотке.
Анализ сыворотки крови пациента включает в себя определение антител, образующихся в организме в ответ на проникновение возбудителя. Об острой фазе заболевания говорит наличие вирусоспецифических антител IgM. Но срок их присутствия в организме варьирует от нескольких недель до месяцев и даже лет. Нарастание уровня IgG происходит в течение нескольких недель. При этом вначале образуются низкоафинные антитела, образующиеся в начале иммунного ответа при размножении вируса в организме и сохраняющиеся в течение 1-1,5 мес. от начала заболевания. Позже, в процессе созревания иммунного ответа, в организме появляются высокоафинные IgG антитела. Высокоафинные антитела остаются в организме длительное время. За счет этих антител развивается быстрый вторичный иммунный ответ в случае повторного попадания возбудителя в организм. В случае латентной инфекции в крови обнаруживаются IgM при обострении или реактивации инфекционного процесса.
В случаях, когда обнаруживаются IgM в крови, необходимо разделять первичную инфекцию и обострение, так как первичная инфекция у беременных женщин ведет к тяжелым последствиям для плода. Кроме того, различаются схемы лечения первичной и латентной инфекций. Для этого рекомендуется определять авидность антител IgG. Если в крови при наличии IgM обнаруживаются IgG с низкой авидностью, то это свидетельствует о первичной (недавней) инфекции. Наличие же высокоавидных антител IgG (в присутствии IgM) говорит о вторичном иммунном ответе в случае попадания возбудителя в организм или обострения (реактивации).
В ИФА тест-системах используют показатель индекса авидности антител (ИА). Суть метода заключается в следующем. При инкубации тестируемых сывороток с адсорбированными антигенами образуются иммунные комплексы. После промывания планшет в часть лунок добавляют раствор, который способствует удалению «ранних» IgG, отличающихся низкой авидностью. После внесения конъюгата контролируют его связывание с комплексом антиген-антитело с помощью раствора хромогена. Интенсивность окраски пропорциональна количеству антител к антигену в образце. После остановки ферментативной реакции измеряют оптическое поглощение окрашенного раствора с помощью спектрофотометра. Присутствие в исследуемом образце вирусспецифических антител с низкой авидностью определяется снижением интенсивности окрашивания по сравнению с лунками без раствора, удаляющего “ранние” IgG.
Индекс авидности (ИА) антител испытуемых сывороток рассчитывают (в %) по формуле:
ИА = ОП1 х 100/ОП2
где:
ОП1 — ОП в лунках с антигенами после обработки раствором, удаляющим низкоавидные IgG;
ОП2 — ОП в лунках с той же сывороткой, не обработанных раствором.
Выявление в испытуемой сыворотке антител с индексом авидности ниже 30-35% (у разных производителей) указывает на свежую первичную инфекцию обследованного пациента. Выявленный показатель авидности, равный или превышающий 40%, указывает на то, что в сыворотке содержатся анамнестические высоко-авидные антитела, свидетельствующие об инфекции в прошлом. Показатель авидности антител в интервале 31-39% может свидетельствовать о поздней стадии первичной инфекции или недавно перенесенной инфекции только при условии выявления антител в высокой концентрации.
Таким образом, определение авидности антител к данному возбудителю позволяет выделить первичную инфекцию, дифференцировать ее от периода реактивации или вторичного проникновения антигена в организм. Но данный тест рекомендуется применять для пациентов, в сыворотке крови которых обнаружены IgM.
Использование авидности IgG-антител в качестве индикатора срока первичного инфицирования, впервые предложенное финскими исследователями (Hedman K. M. с соавт.,1989), в настоящее время в ряде стран введено в практику серологических исследований на TORCH-инфекции. Так, во Франции, где, как и в России, проблема токсоплазмоза по-прежнему актуальна, этот тест входит в обязательный алгоритм обследования при подозрении на токсоплазмоз у беременных женщин.
Что такое авидность? Определение авидности anti-Toxo-IgG антител и anti-CMV-IgG
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Определение авидности anti-Toxo-IgG антител и определение авидности anti-CMV-IgG антител даёт дополнительную информацию, полезную в диагностическом и прогностическом плане при подозрении на токсоплазмоз и цитомегаловирусную инфекции, в особенности во время беременности или планировании беременности.
В лаборатории ИНВИТРО определение авидности антител класса IgG проводится в составе серологических тестов для диагностики токсоплазмоза и цитомегаловирусной инфекции (тесты №80, №81 и №82, №83) в качестве дополнительных подтверждающих тестов, которые выполняются бесплатно для пациента при выявлении комбинации результатов:
Подтверждение или исключение факта недавнего первичного инфицирования Toxoplasma gondii и Сytomegalovirus особенно важно при обследовании беременных женщин, поскольку риск патологии развития плода существенно увеличен при остром первичном инфицировании во время беременности, по сравнению с хронической инфекцией и реактивацией латентной инфекции. Поэтому постоянно идёт поиск новых диагностических подходов, позволяющих максимально достоверно оценить стадию и форму инфекционного процесса. Использование авидности IgG-антител в качестве индикатора срока первичного инфицирования, впервые предложенное финскими исследователями (Hedman K. M. с соавт.,1989), в настоящее время в ряде стран введено в практику серологических исследований на TORCH-инфекции. Так, во Франции, где, как и в России, проблема токсоплазмоза по-прежнему актуальна, этот тест входит в обязательный алгоритм обследования при подозрении на токсоплазмоз у беременных женщин.
Подготовка к исследованию: не требуется.
Метод исследования. В основе этих тестов лежит метод дифференциации высоко- и низкоавидных антител с помощью обработки комплексов антиген-антитело раствором мочевины, вызывающим денатурацию белка. После такой обработки связь низкоавидных антител с антигеном нарушается. Авидность IgG-антител в пробе оценивается с помощью расчётного показателя индекса авидности, который представляет собой отношение результата иммуноферментного определения концентрации IgG-антител в пробе, подвергнутой обработке мочевиной, к результату измерения концентрации IgG-антител в пробе, не обработанной диссоциирующим агентом.
Единицы измерения: результаты приводятся в виде индекса авидности.
Интерпретация результатов теста. Внимание! Фирма-производитель наборов предупреждает, что любой результат теста, особенно при обследовании беременных женщин, должен быть подтверждён при повторном тестировании.
При диагностике токсоплазмоза:
При диагностике цитомегаловирусной инфекции:
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
TOXO IgG – Токсоплазмоз Авидность
Описание исследования
Токсоплазмоз – одна из четырех репродуктивно значимых инфекций, комплекс которых получил название TORCH (оно составлено первыми латинскими буквами наименования инфекционных агентов – Toxoplasma (токсоплазма), Rubella (краснуха), Cytomegalovirus (цитомегаловирус), Herpes (герпес)). Независимо от формы – первичной или хронической, любая из названных инфекций представляет серьезную угрозу для нормального внутриутробного развития ребенка. Поэтому всех беременных женщин в обязательном порядке обследуют на TORCH-инфекции. Однако для определения иммунитета к ним, своевременного проведения лечения, профилактических и контрольных мероприятий, будущим мамам рекомендуется пройти обследование за несколько месяцев до планируемого срока зачатия.
Подтверждение или опровержение наличия первичной инфекции особенно актуально и чрезвычайно важно именно для беременных женщин. Это объясняется высокой степенью вероятности внутриутробного заражения ребенка недавно инфицированной матерью. Исследование авидности антител класса IgG как показателя срока первичной инфекции в настоящее время входит в комплекс тестов (серологических исследований) по выявлению специфических иммуноглобулинов к возбудителям TORCH-инфекций вообще и токсоплазмозу в частности.
Авидность – это характеристика общей прочности соединения антитела с антигеном. Она зависит от силы воздействия антитела на антиген (аффинности антитела) и количества центров в молекуле антитела, способных связать антиген (связывающих участков).
Проникновение возбудителя инфекции в организм вызывает иммунный ответ на действие его антигенов, активируя выработку специфических антител. Существует определенная последовательность их появления. Первыми продуцируются антитела класса IgМ, а затем, спустя некоторое время – класса IgG. Авидность IgG-антител поначалу достаточно низкая, однако, по мере усиления иммунного ответа, она возрастает. Это делает связь антител с антигенами более прочной. В результате уничтожение агентов инфекции становится более эффективной. Однако процесс этот может развиваться в течение недель или даже месяцев. Поэтому, высокая авидность антител IgG свидетельствует о невозможности недавнего инфицирования. Цель определения индекса авидности – уточнение сроков заражения и выяснение специфики инфекции (первичной, рецидивирующей хронической или бессимптомной).
Метод определения авидности IgG базируется на разделении их на две группы: антитела, обладающие высокой или низкой связывающей способностью. Для этого на соединение антител с антигенами воздействуют раствором, нарушающим структуру молекулы белков. Такая манипуляция приводит к нарушению слабых связей низкоавидного антитела с антигеном и не воздействует на связь высокоавидного антитела с антигеном. Для оценки авидности используется расчетный показатель – индекс авидности. Он равен отношению количества антител после обработки пробы раствором, разрушающим связь антитело-антиген, к количеству антител до введения раствора.
Одновременное наличие в крови антител двух классов дает повод говорить о недавнем первичном заражении. Основание для вывода – знание срока исчезновения антител IgМ (как правило период их присутствия составляет не более 3 месяцев от момента инфицирования). Однако антитела класса М могут обнаруживаться в кровотоке и значительно позже. Срок их пребывания в крови зависит от индивидуальной реакции организма на возбудителя инфекции и от его вида. Как показали исследования, при заражении токсоплазмой остаточные представители IgМ могут иногда присутствовать в крови до полутора и более лет. Более того, даже самые лучшие тесты не способны гарантировать стопроцентную точность исследования. Так, в связи с высокой чувствительностью тестов существует вероятность ложноположительного результата, что нередко наблюдается при обследовании беременных женщин. Поэтому выявление в крови антител IgG, обладающих высокой авидностью, является достаточным доказательством рецидива хронической инфекции, а не первичного заражения, а присутствие антител IgМ в период беременности не обязательно означает наличие первичной инфекции.
При получении положительных результатов на специфические антитела IgМ рекомендуется их обязательная перепроверка другими методами исследования или проведением теста на авидность антител IgG. Наличие высоковидных IgG-антител исключает вероятность первичного заражения, т.к. низкоавидные антитела циркулируют в кровотоке в течение первых 3-5 месяцев, хотя в некоторых случаях их продукция затягивается на более длительный срок. Поэтому присутствие низкоавидных антител IgG еще не доказывает «свежести» инфекции, но является дополнительным аргументом, подтверждающим результаты других видов исследования.
Необходимо помнить, что кровь новорожденных и грудных детей может содержать IgG-антитела, попавшие из крови матери. Это создает определенные трудности в истолковании результатов тестирования антител класса G и их авидности. Обследование лиц, инфицированных ВИЧ или больных СПИД, также затруднено вследствие низкого (или даже неопределимого) уровня антител в сыворотке крови. Для их обследования в качестве дополнительного рекомендуется проведение ПЦР-теста (метод полимеразной цепной реакции).
Подготовка к исследованию
Кровь для анализа рекомендуется отбирать натощак, в утренние часы или не ранее чем через 4 часа после еды.
Общие рекомендации при подготовке к сдаче крови:
Забор крови не рекомендуется проводить после инструментального, ректального, мануального, ультразвукового, рентгеновского обследований, биопсии, кольпоскопии, гастроскопии, физиопроцедур, массажа, других лечебных и/или диагностических манипуляций.
Показания к исследованию
Также обследование входит в комплекс тестов по выявлению специфических антител к Toxoplasma gondii, применяемых для диагностики токсоплахмоза.
Интерпретация исследования
По результатам исследования рассчитывается индекс авидности, измеряемый в процентах (%).
Производитель реагентов настойчиво рекомендует перепроверять результаты тестов (особенно беременных женщин) вне зависимости от их результатов.
При уровне антител IgG ниже определяемого расчет индекса авидности невозможен.
Если есть подозрение на острую инфекцию, то через полторы-две недели рекомендуется повторное проведение тестирования на специфические антитела классов IgM и IgG к Toxoplasma gondii.
Диагностика инфицирования токсоплазмозом беременных с использованием показателей тестов по определению IgM и IgG осуществляется следующим образом:
Профилактический осмотр 1 раз в три месяца.
Для Toxoplasma gondii такой ответ свидетельствует об устойчивом иммунитете
В данном случае рекомендовано повторное обследование через 2 недели. При появлении в последствие антител есть основания для диагноза «первичная инфекция».
В пользу неспецифического ответа свидетельствует отсутствие через 2-3 недели в повторной пробе IgG.
Показано проведение исследования авидности антител IgG.
Тестирование авидности специфических антител IgG к Toxoplasma gondii
Низкая авидность
Высокая авидность
Рекомендуется подтверждающее исследование.
Рекомендуется подтверждающее исследование.
Не исключено первичное инфицирование в период беременности.
Исключается вероятность первичного инфицирования в течение последних 3-4 месяцев.
Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:
Ф.И.О.: Петрова Инна Ивановна Пол: ж Год рождения: хх.хх.хххх
Дата исследования: хх.хх.хххх
Исследование
Результат
Нормы интерпретации
Примечание
Дата выдачи (дата исследования): хх.хх.хххх
Авидность антител в диагностике инфекционных заболеваний
Адекватное лечение и профилактика инфекционных заболеваний требуют быстрой и точной лабораторной диагностики.
Применение общепринятых и широко используемых иммунологических и серологических методов далеко не всегда позволяют четко дифференцировать первичную инфекцию от реинфекции или обострения заболевания.
Иммуноглобулины классов М (IgM) и А (IgA) могут длительное время присутствовать в сыворотке крови после наступления сероконверсии. Первичное инфицирование бактериальным или вирусным агентом, как правило, сопровождается продукцией иммуноглобу¬линов класса М, которые позже сменяются специфическими IgG- антителами.
Определение титра антител класса G скорее свидетельствует о перенесенной в прошлом инфекции, хотя, в отдельных случаях при высоких титрах может говорить и об активации процесса. Для разрешения подобных диагностических сложностей нужно применять тест на авидность IgG антител.
Выявление в сыворотке крови антител с индексом авидности ниже 15-50% указывает на свежую первичную инфекцию, как правило, в течение первой стадии инфекции. Авидность в зоне 31-49% свидетельствует о поздней первичной инфекции.
Показатель авидности превышающий 50%, говорит о наличии в исследуемой сыворотке высокоавидных антител, характерных для персистирующей инфекции или инфекции, перенесенной в прошлом.
Таким образом, выявление в сыворотках антител IgG с низкой авидностью демонстрирует первичную (недавнюю) инфекцию, тогда как высокоавидные антитела говорят о длительно текущей инфекции: перенесенной, реактивации либо о латентной инфекции.